Numération des levures avec l’hématimètre de Neubauer

Principe:

Les cellules de numération sont des instruments de mesure de précision fabriquées en verre optique spécial. Elles sont utilisées pour déterminer le nombre de cellules par volume d’un fluide. Les particules sont comptées à l’oeil sous microscope. Dans le cas de la fermentation de la bière, cette méthode nous permet de quantifier par volume le nombre de levures brettanomyces cerevisiae et d’estimer la vitalité en quantifiant le ratio levures vivante par rapport aux levures mortes.

Matériel:

L’hématimètre de NeubauerIl est une grosse lamelle de verre en forme de porte-objet d’environ 30×70 mm et 4 mm d’épaisseur. Dans une plaque simple, la partie centrale, où se réalise le comptage, se divise en 3 zones:

  • Dans la partie centrale se trouve gravée un réticule.
  •  Dans le cas de plaques doubles, qui sont les plus communes, il existe 2 zones de comptage, une supérieure et une inférieure à l’axe longitudinal de la plaque.

La plaque couvre-objet est une lamelle de verre d’environ 22mm x 22mm. Elle doit se mettre sur la plaque de comptage de façon à ce qu’elle recouvre la partie centrale de celle-ci, délimitant un espace entre la plaque et le couvre-objet de 0.1mm.

Volume considéré:

La hauteur entre la chambre et la lamelle étant de 0,1mm, le volume est de :

  • Grand carré 1mm x 1mm x 0,1 mm = 0,1 mm3 = 0,1 μL
  • Très petit carré 0,05mm x 0,05mm x 0,1 mm = 0,00025 mm3 = 0,00025 μL

Comptage:

Quel que soit l’hématimètre et la surface à compter, on compte tous les éléments situés à l’intérieur des lignes délimitant cette surface. Pour les éléments situés sur les lignes, on applique la règle de la limite des lignes :

  • Compter les cellules touchant la ligne du haut et celle de droite.
  • Ne pas compter les cellules touchant la ligne du bas, ni celle de gauche.

Calcul et résultat:

La concentration est donc

Levures par µL = (Nombre de cellules comptéesdilution)/((surface de numération (mm²))(profondeur de la chambre (mm))


Formulaire d’aide au calcul: (Activez Javascript)

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trois + douze =